Transfer de energie prin rezonanță fluorescentă (FRET)
Transferul de energie prin rezonanță fluorescentă (FRET) este un proces de transfer de energie non-radiație în care energia de stare excitată de donator este transferată către starea excitată de acceptor prin interacțiunea cuplurilor electrice intermoleculare. Acest proces nu implică fotoni și, prin urmare, este non-radiator. Acest test are avantajele de a fi rapid, sensibil și simplu.
Colorantul folosit în testul FRET poate fi identic. Dar în majoritatea aplicațiilor, diferiți coloranți sunt folosiți de fapt. Pe scurt, transferul energiei de rezonanță luminoasă este transferul unei perechi de dipoli de la donator (colorant 1) către acceptor (colorant 2) atunci când grupul donator este excitat. În general, spectrul de emisie al grupului de fluorofor al donatorului se suprapune cu spectrul de absorbție al grupului acceptor. „Când distanța dintre cele două fluorofore este adecvată (10 - 100 A), se poate observa transferul de energie fluorofor de la donator la acceptor.” Metoda de transfer de energie depinde de structura chimică a receptorului:
1. Este transformat în vibrații moleculare, adică lumina luminoasă a transferului de energie dispare. (Receptorul este un stingere ușoară)
2. Emisiunea este mai intensă decât receptorul în sine, rezultând o redshift în spectrul de fluorescență secundară. " (Receptorii sunt emițători luminoși).
Grupul donator (EDANS) și gena acceptor (dabcyl) sunt legate uniform de substratul natural al proteazei HIV, iar atunci când substratul nu este deconectat, dabcyl poate Quenle edans și apoi devine nedetectabil la fluor. La deconectarea proteazei HIV-1, EDAN-urile nu mai sunt stinse de Dabcyl, iar luciferazele edans pot fi ulterior detectate. Disponibilitatea inhibitorilor de protează poate fi monitorizată prin modificări ale intensității fluorescenței EDAN -urilor.
Peptidele FRET sunt instrumente convenabile pentru a studia nespecificitatea peptidazei. Deoarece procesul său de reacție poate fi monitorizat continuu, oferă o metodă convenabilă pentru detectarea activității enzimelor. SHEEN -ul produs după hidroliza legăturilor peptidice de către donator/acceptor oferă o măsură a activității enzimei la concentrații nanomolare. Când peptida FRET este intactă, arată o dispariție bruscă a blițului intern, dar atunci când orice legătură peptidă opusă donatorului/acceptorului se rupe, eliberează un bliț, care poate fi detectat continuu și activitatea enzimatică poate fi apoi cuantificată.
Timpul post: 2025-07-02