În cercetările biologice, de obicei, sunt utilizate polipeptide cu o secvență lungă. Pentru peptide cu mai mult de 60 de aminoacizi în secvență, expresia genică și SDS-PAGE sunt utilizate în general pentru a le obține. Cu toate acestea, această metodă durează mult timp, iar efectul final de separare a produsului nu este bun.
Provocări și soluții pentru sinteza peptidelor lungi
În sinteza peptidelor lungi, ne confruntăm întotdeauna cu o problemă, adică, piestirea sterică a reacției de condensare crește odată cu creșterea secvenței în sinteză, iar timpul de reacție trebuie ajustat pentru a face reacția completă. Cu toate acestea, cu cât timpul de reacție este mai lung, cu atât mai multe efecte secundare sunt produse și se formează o porțiune din peptida țintă. Astfel de reziduuri - lanțurile peptidice deficitare sunt impurități cheie produse în sinteza peptidelor lungi. Prin urmare, în sinteza peptidei lungi, problema cheie pe care trebuie să o depășim este să explorăm condițiile de reacție de înaltă calitate și metodele de reacție, astfel încât să facem reacția de condensare a aminoacizilor mai cuprinzătoare și mai completă. În plus, reduceți timpul de reacție, deoarece cu cât timpul de reacție este mai lung, cu atât reacțiile laterale mai incontrolabile, cu atât sunt mai complexe produsele secundare. Prin urmare, sunt rezumate următoarele trei puncte:
Se poate utiliza sinteza cu microunde: Pentru unii aminoacizi întâlniți în procesul de sinteză care nu sunt ușor de integrat, se poate utiliza sinteza cu microunde. Această metodă are rezultate remarcabile și reduce foarte mult timpul de reacție și reduce formarea a două produse secundare cheie.
Metoda de sinteză a fragmentelor poate fi utilizată: Când unele peptide sunt dificil de sintetizat prin metode de sinteză comune și nu sunt ușor de purificat, putem adopta întreaga condensare a mai multor aminoacizi într -un anumit segment al peptidei la lanțul peptidului în ansamblu. Această metodă poate rezolva, de asemenea, multe probleme în sinteză.
Sinteza acilhidrazide poate fi utilizată: Sinteza de acilhidrazidă a peptidelor este o metodă de sinteză în fază solidă a peptidei N-terminale CYS și a polipeptidului C-terminal Hydrazide reacție selectivă între formarea legăturilor de amidă pentru a realiza metoda de legare a peptidelor. Pe baza poziției Cys în lanțul peptidic, această metodă împarte întregul lanț peptidic în mai multe secvențe și, respectiv, le sintetizează. În cele din urmă, peptida țintă este obținută prin reacție de condensare în fază lichidă. Această metodă nu numai că reduce foarte mult timpul de sinteză al peptidei lungi, dar crește semnificativ și puritatea produsului final.
Purificarea lungă a peptidelor
Particularitatea peptidelor lungi duce inevitabil la componente complexe ale peptidelor brute. Prin urmare, este, de asemenea, o provocare să purificați peptidele lungi de către HPLC. Seria amiloidă a procesului de purificare a polipeptidelor, absorbind multă experiență și utilizat cu succes în purificarea peptidei lungi. Prin adoptarea de echipamente noi, amestecarea mai multor sisteme de purificare, separarea repetată și alte metode de experiență, rata de succes a purificării peptidelor lungi a fost mult îmbunătățită.
Timpul post: 2025-07-03