În cercetarea biologică se folosesc de obicei polipeptide cu o secvență lungă.Pentru peptidele cu mai mult de 60 de aminoacizi în secvență, expresia genei și SDS-PAGE sunt utilizate în general pentru a le obține.Cu toate acestea, această metodă durează mult timp și efectul final de separare a produsului nu este bun.
Provocări și soluții pentru sinteza lungă de peptide
În sinteza peptidelor lungi, ne confruntăm întotdeauna cu o problemă, adică obstacolul steric al reacției de condensare crește odată cu creșterea secvenței în sinteză, iar timpul de reacție trebuie ajustat pentru a finaliza reacția.Cu toate acestea, cu cât timpul de reacție este mai lung, cu atât se produc mai multe efecte secundare și se formează o porțiune din peptida țintă.Astfel de reziduuri – lanțurile peptidice deficitare sunt impurități cheie produse în sinteza lungă a peptidei.Prin urmare, în sinteza peptidei lungi, problema cheie pe care trebuie să o depășim este să explorăm condițiile de reacție de înaltă calitate și metodele de reacție, astfel încât reacția de condensare a aminoacizilor să fie mai cuprinzătoare și mai completă.În plus, reduceți timpul de reacție, deoarece cu cât timpul de reacție este mai lung, cu atât sunt mai multe reacții secundare necontrolabile, cu atât produsele secundare sunt mai complexe.Prin urmare, sunt rezumate următoarele trei puncte:
Sinteza cu microunde poate fi utilizată: Pentru unii aminoacizi întâlniți în procesul de sinteză care nu sunt ușor de integrat, se poate folosi sinteza cu microunde.Această metodă are rezultate remarcabile și reduce foarte mult timpul de reacție și reduce formarea a două produse secundare cheie.
Se poate folosi metoda de sinteză a fragmentelor: Când unele peptide sunt greu de sintetizat prin metode de sinteză obișnuite și nu sunt ușor de purificat, putem adopta întreaga condensare a mai multor aminoacizi dintr-un anumit segment al peptidei la lanțul peptidic în ansamblu.Această metodă poate rezolva și multe probleme de sinteză.
Se poate utiliza sinteza acilhidrazidei: sinteza acilhidrazidă a peptidelor este o metodă de sinteză în fază solidă a peptidei Cys N-terminale și a polipeptidei C-terminale hidrazidei reacție chimică selectivă între formarea de legături amidice pentru a realiza metoda de legare a peptidei.Pe baza poziției Cys în lanțul peptidic, această metodă împarte întreg lanțul peptidic în secvențe multiple și, respectiv, le sintetizează.În cele din urmă, peptida țintă este obținută prin reacția de condensare în fază lichidă.Această metodă nu numai că reduce foarte mult timpul de sinteză a peptidei lungi, dar crește semnificativ și puritatea produsului final.
Purificare lungă cu peptide
Particularitatea peptidelor lungi duce inevitabil la componente complexe ale peptidelor brute.Prin urmare, purificarea peptidelor lungi prin HPLC este, de asemenea, o provocare.Seria amiloid de proces de purificare a polipeptidelor, absorbind o mulțime de experiență și utilizat cu succes în purificarea peptidei lungi.Prin adoptarea de noi echipamente, amestecarea mai multor sisteme de purificare, separarea repetată și alte metode de experiență, rata de succes a purificării lungi de peptide a fost mult îmbunătățită.
Ora postării: 18-apr-2023