Antigenii proteici recombinați au adesea mai multe epitopuri diferite, unele dintre ele fiind epitopuri de secvență și unele sunt epitopuri structurale. Anticorpii policlonali obținuți prin imunizarea animalelor cu antigene denaturate sunt amestecuri de anticorpi specifici epitopilor individuali și pot fi folosiți în general pentru a detecta structuri naturale sau proteine țintă denaturate. Un beneficiu secundar al utilizării proteinelor denaturate ca imunogeni este faptul că proteinele denaturate tind să fie mai imunogene și pot stimula un răspuns imun puternic la animale.
Sistemul de expresie al Escherichia coli este de obicei ales în scopuri antigenice, deoarece este cel mai costisitor sistem din punct de vedere al timpului și al banilor. Pentru a îmbunătăți posibilitatea expresiei proteice țintă și a comodității purificării, uneori este exprimat doar un mic fragment din proteina țintă, cum ar fi un domeniu specific.
Structura tridimensională a proteinelor
Domeniul specific al unei proteine
Dacă scopul pregătirii anticorpilor este exclusiv pentru detectarea WB, este economic și rapid să folosești peptida mică sintetică ca antigen, dar există un risc de imunogenitate slabă sau non-regenicitate din cauza selecției necorespunzătoare a segmentului peptidului. Deoarece prepararea anticorpilor necesită o perioadă lungă, două sau trei segmente de peptide diferite sunt adesea selectate pentru a pregăti anticorpi folosind antigen polipeptid pentru a asigura rata de succes a experimentului.
Puritatea antigenului polipeptidic pentru imunizare este necesară pentru a fi mai mare de 80%. Deși o puritate mai mare poate obține teoretic anticorpi cu o specificitate mai bună, în practică, animalele produc întotdeauna un număr mare de anticorpi nespecifici, mascând astfel beneficiile purității antigenului.
În plus, prepararea anticorpilor de la peptide mici trebuie să fie reticulată la antigenul purtător adecvat pentru a-și îmbunătăți imunogenitatea. Doi transportatori antigenici comuni sunt KLH și BSA.
Timpul post: 2025-07-03