Antigenele proteice recombinante au adesea mai mulți epitopi diferiți, dintre care unii sunt epitopi de secvență și alții sunt epitopi structurali.Anticorpii policlonali obținuți prin imunizarea animalelor cu antigene denaturate sunt amestecuri de anticorpi specifici epitopilor individuali și pot fi utilizați în general pentru a detecta structuri naturale sau proteine țintă denaturate.Un beneficiu secundar al utilizării proteinelor denaturate ca imunogeni este că proteinele denaturate tind să fie mai imunogene și pot stimula un răspuns imun puternic la animale.
Sistemul de expresie al Escherichia coli este de obicei ales în scopuri antigenice deoarece este cel mai costisitor sistem din punct de vedere al timpului și al banilor.Pentru a îmbunătăți posibilitatea exprimării proteinei țintă și comoditatea purificării, uneori este exprimat doar un mic fragment al proteinei țintă, cum ar fi un domeniu specific.
Structura tridimensională a proteinelor
Domeniul specific al unei proteine
Dacă scopul preparării anticorpilor este exclusiv pentru detectarea wb, este economic și rapid să se utilizeze peptidă sintetică mică ca antigen, dar există riscul de imunogenitate slabă sau non-regenitate din cauza selecției inadecvate a segmentului peptidic.Deoarece prepararea anticorpilor necesită o perioadă lungă, două sau trei segmente peptidice diferite sunt adesea selectate pentru a prepara anticorpi folosind antigen polipeptidic pentru a asigura rata de succes a experimentului.
Puritatea antigenului polipeptidic pentru imunizare trebuie să fie mai mare de 80%.Deși o puritate mai mare poate obține teoretic anticorpi cu o specificitate mai bună, în practică, animalele produc întotdeauna un număr mare de anticorpi nespecifici, mascând astfel beneficiile purității antigenului.
În plus, prepararea anticorpilor din peptide mici trebuie să fie reticulat cu antigenul purtător adecvat pentru a spori imunogenitatea acestuia.Doi purtători antigenici obișnuiți sunt KLH și BSA.
Ora postării: 23-mar-2023