Ca instrument de înaltă precizie, HPLC poate duce cu ușurință la unele mici probleme supărătoare dacă nu este operat în mod corect în timpul utilizării.Una dintre cele mai frecvente probleme este problema compresiei coloanei.Cum să depanați rapid un cromatograf defect.Sistemul HPLC constă în principal dintr-o sticlă rezervor, o pompă, un injector, o coloană, o cameră de temperatură a coloanei, un detector și un sistem de procesare a datelor.Pentru întregul sistem, stâlpii, pompele și detectoarele sunt componentele cheie și locațiile principale care sunt predispuse la probleme.
Cheia presiunii coloanei este zona care necesită o atenție sporită atunci când se utilizează HPLC.Stabilitatea presiunii coloanei este strâns legată de forma vârfului cromatografic, eficiența coloanei, eficiența separării și timpul de retenție.Stabilitatea presiunii coloanei nu înseamnă că valoarea presiunii este stabilă la o valoare stabilă, ci mai degrabă că intervalul de fluctuație a presiunii este între 345 kPa sau 50 PSI (permițând utilizarea gradientului de eluție atunci când presiunea coloanei este stabilă și se schimbă lent).Presiunea prea mare sau prea mică este o problemă de presiune a coloanei.
Cel mai predispus la defecțiuni și soluții HPLC
1, presiunea ridicată este cea mai comună problemă în utilizarea HPLC.Aceasta înseamnă o creștere bruscă a presiunii.În general, există următoarele motive: (1) În general, acest lucru se datorează blocării canalului de curgere.În acest moment, ar trebui să o examinăm pe bucăți.A.Mai întâi, tăiați admisia pompei de vid.În acest moment, tubul PEEK a fost umplut cu lichid, astfel încât tubul PEEK să fie mai mic decât sticla de solvent pentru a vedea dacă lichidul picura în voie.Dacă lichidul nu se scurge sau se scurge încet, capul filtrului cu solvent este blocat.Tratament: Înmuiați în acid azotic 30% timp de o jumătate de oră și clătiți cu apă ultrapură.Dacă lichidul picură aleatoriu, capul filtrului cu solvent este normal și este verificat;b.Deschideți supapa de purjare astfel încât faza mobilă să nu treacă prin coloană, iar dacă presiunea nu este redusă semnificativ, capul alb al filtrului este blocat.Tratament: punctele albe filtrate au fost îndepărtate și sonicate cu izopropanol 10% timp de o jumătate de oră.Presupunând că presiunea scade sub 100PSI, capul alb filtrat este normal și este în curs de verificare;c.Scoateți capătul de ieșire al coloanei, dacă presiunea nu scade, coloana este blocată.Tratament: Dacă este un blocaj de sare tampon, clătiți 95% până când presiunea este normală.Dacă obstrucția este cauzată de un material mai bine conservat, ar trebui utilizat un flux mai puternic decât faza mobilă actuală pentru a se grăbi spre presiunea normală.Dacă presiunea de curățare pe termen lung nu scade conform metodei de mai sus, intrarea și ieșirea coloanei pot fi considerate a fi conectate la instrument, dimpotrivă, iar coloana poate fi curățată cu faza mobilă.În acest moment, dacă presiunea coloanei încă nu este redusă, placa de sită de intrare în coloană poate fi înlocuită doar, dar odată ce funcționarea nu este bună, este ușor să duceți la reducerea efectului coloanei, așa că încercați să utilizați mai puțin.Pentru probleme dificile, poate fi luată în considerare înlocuirea coloanei.
(2) Setare incorectă a debitului: Debitul corect poate fi resetat.
(3) Raportul de curgere incorect: indicele de vâscozitate al diferitelor proporții de fluxuri este diferit, iar presiunea corespunzătoare a debitului cu vâscozitate mai mare este, de asemenea, mai mare.Dacă este posibil, solvenții cu vâscozitate mai mică pot fi înlocuiți sau restabiliți și pregătiți.
(4) Deriva de zero a presiunii sistemului: reglați zero al senzorului de nivel al lichidului.
2, presiunea este prea scăzută (1) este cauzată de obicei de scurgerea sistemului.Ce trebuie să faceți: găsiți fiecare conexiune, în special interfața de la ambele capete ale coloanei și strângeți zona de scurgere.Scoateți stâlpul și strângeți sau căptușiți filmul de PTFE cu forța adecvată.
(2) Gazul intră în pompă, dar presiunea este de obicei instabilă în acest moment, ridicată și scăzută.Mai grav, pompa nu va putea absorbi fluidul.Metoda de tratament: deschideți supapa de curățare și curățați la un debit de 3~5ml/min.Dacă nu, bulele de aer au fost aspirate la supapa de evacuare folosind un tub cu ac dedicat.
(3) Fără flux de fază mobilă: verificați dacă există o fază mobilă în sticla rezervorului, dacă chiuveta este scufundată în faza mobilă și dacă pompa funcționează.
(4) Supapa de referință nu este închisă: supapa de referință este închisă după decelerare.De obicei scade la 0,1.~ 0,2 ml/ min după închiderea supapei de referință.
Rezumat:
În această lucrare sunt analizate doar problemele comune în cromatografia lichidă.Desigur, în aplicația noastră practică, vom întâlni mai multe alte probleme.În tratarea erorilor, ar trebui să respectăm următoarele principii: să schimbăm doar un factor la un moment dat pentru a determina relația dintre factorul ipotetic și problemă;În general, atunci când înlocuim piesele pentru depanare, ar trebui să acordăm atenție punerii la loc a pieselor intacte demontate pentru a preveni risipa;Formarea unui bun obicei de înregistrare este cheia succesului tratării erorilor.În concluzie, atunci când utilizați HPLC, este important să acordați atenție pretratării probelor și funcționării și întreținerii corecte a echipamentului.
Ora postării: 18-sept-2023