Ca instrument de înaltă precizie, HPLC poate duce cu ușurință la unele mici probleme supărătoare, dacă nu este operat în modul corect în timpul utilizării. Una dintre cele mai frecvente probleme este problema de compresie a coloanei. Cum să depanați rapid un cromatograf defect. Sistemul HPLC constă în principal dintr -o sticlă de rezervor, o pompă, un injector, o coloană, o cameră de temperatură a coloanei, un detector și un sistem de prelucrare a datelor. Pentru întregul sistem, pilonii, pompele și detectoarele sunt componentele cheie și principalele locații care sunt predispuse la probleme.
Cheia presiunii coloanei este zona care are nevoie de o atenție deosebită atunci când utilizați HPLC. Stabilitatea presiunii coloanei este strâns legată de forma vârfului cromatografic, eficiența coloanei, eficiența de separare și timpul de retenție. Stabilitatea presiunii coloanei nu înseamnă că valoarea presiunii este stabilă la o valoare stabilă, ci mai degrabă că intervalul de fluctuație a presiunii este cuprins între 345kPa sau 50psi (permițând utilizarea eluției gradientului atunci când presiunea coloanei este stabilă și se schimbă lent). Presiunea prea mare sau prea mică este o problemă de presiune a coloanei.
Cele mai predispuse la eșecurile și soluțiile HPLC
1, presiunea ridicată este cea mai frecventă problemă în utilizarea HPLC. Aceasta înseamnă o creștere bruscă a presiunii. În general, există următoarele motive: (1) În general, acest lucru se datorează blocajului canalului de curgere. În acest moment, ar trebui să -l examinăm. o. În primul rând, tăiați intrarea pompei de vid. În acest moment, tubul Peek a fost umplut cu lichid, astfel încât tubul Peek să fie mai mic decât sticla de solvent pentru a vedea dacă lichidul picura în voie. Dacă lichidul nu picură sau se scurge încet, capul de filtru de solvent este blocat. Tratament: Înmuiați în 30% acid azotic timp de o jumătate de oră și clătiți cu apă ultrapură. Dacă lichidul se scurge la întâmplare, capul de filtru de solvent este normal și este verificat; b. Deschideți supapa de purjare astfel încât faza mobilă să nu treacă prin coloană și dacă presiunea nu este redusă semnificativ, capul alb al filtrului este blocat. Tratament: Whitehead -uri filtrate au fost îndepărtate și sonicate cu 10% izopropanol timp de o jumătate de oră. Presupunând că presiunea scade sub 100psi, capul alb filtrat este normal și este verificat; C. Scoateți capătul de ieșire al coloanei, dacă presiunea nu scade, coloana este blocată. Tratament: Dacă este un blocaj tampon de sare, clătiți 95% până când presiunea este normală. Dacă obstrucția este cauzată de un material mai puternic conservat, un flux mai puternic decât faza mobilă actuală trebuie utilizat pentru a se grăbi spre presiune normală. Dacă presiunea de curățare pe termen lung nu scade conform metodei de mai sus, intrarea și ieșirea coloanei pot fi considerate a fi conectate la instrument, iar coloana poate fi curățată cu faza mobilă. În acest moment, dacă presiunea coloanei nu este încă redusă, placa de sită de intrare a coloanei poate fi înlocuită doar, dar odată ce operația nu este bună, este ușor să conduci la reducerea efectului coloanei, așa că încercați să utilizați mai puțin. Pentru probleme dificile, poate fi luată în considerare înlocuirea coloanelor.
(2) Setarea debitului incorectă: Debitul corect poate fi resetat.
(3) Raportul de debit incorect: Indicele de vâscozitate al diferitelor proporții de fluxuri este diferit, iar presiunea de sistem corespunzătoare a fluxului cu vâscozitate mai mare este de asemenea mai mare. Dacă este posibil, solvenții de vâscozitate mai mici pot fi înlocuiți sau re-set și pregătiți.
(4) Presiunea sistemului Driind zero: Reglați zero al senzorului de nivel lichid.
2, presiunea este prea scăzută (1) este de obicei cauzată de scurgerea sistemului. Ce trebuie să faceți: găsiți fiecare conexiune, în special interfața de la ambele capete ale coloanei și strângeți zona de scurgere. Îndepărtați postarea și strângeți sau aliniați filmul PTFE cu forța corespunzătoare.
(2) Gazul intră în pompă, dar presiunea este de obicei instabilă în acest moment, ridicată și scăzută. Mai în serios, pompa nu va putea absorbi lichidul. Metoda de tratament: Deschideți supapa de curățare și curățați la un debit de 3 ~ 5ml/min. Dacă nu, bulele de aer au fost aspirate la supapa de evacuare folosind un tub de actor dedicat.
(3) Fără ieșire de fază mobilă: verificați dacă există o fază mobilă în sticla de rezervor, dacă chiuveta este cufundată în faza mobilă și dacă pompa funcționează.
(4) Valva de referință nu este închisă: supapa de referință este închisă după decelerare. De obicei, coboară la 0,1. ~ 0,2 ml/ min după închiderea supapei de referință.
Rezumat:
În această lucrare, sunt analizate doar probleme comune în cromatografia lichidă. Desigur, în aplicația noastră practică, vom întâmpina mai multe alte probleme. În gestionarea erorilor, ar trebui să urmărim următoarele principii: Schimbați doar un factor la un moment dat pentru a determina relația dintre factorul ipotetic și problemă; În general, atunci când înlocuim piesele pentru depanare, ar trebui să acordăm atenție la punerea în aplicare a pieselor intacte demontate pentru a preveni deșeurile; Formarea unui obicei bun record este cheia succesului manipulării defectelor. În concluzie, atunci când utilizați HPLC, este important să acordați atenție la pretratarea eșantionului și la funcționarea și întreținerea corespunzătoare a echipamentului.
Timpul post: 2025-07-02