Prezentare generală a expresiei proteice

Proteinexpression se referă la tehnologia de reproducere a genei țintă într-un vector artificial și apoi la introducerea acesteia în celula receptoare sau în sistemul fără celule pentru a exprima proteina în sistemul heterolog.

Expresia proteinei poate rezolva problema pe care proteinele native sunt dificil de obținut. De la prima stabilire a expresiei proteice heterologe în anii '70, mii de proteine recombinante au fost exprimate cu succes, ceea ce promovează eficient dezvoltarea continuă a biotehnologiei și a cercetării și industriei biomedicale.

Obiectiv:

Prin expresia proteinei, este mai întâi posibil să se obțină proteine dificil de obținut din surse naturale.

În al doilea rând, lotul mare și puritatea ridicată a produselor de expresie proteică nu numai că facilitează analiza proteinei țintă, dar, de asemenea, reduc mult costurile.

Mai important, proteinele recombinante sunt de obicei selectate pentru a indica o biosecuritate ridicată a celulei gazdă, evitând astfel unele riscuri potențiale de biosecuritate ale gazdei patogene.

Metodă:

Acesta include în principal procesele de replicare a fragmentelor de gene, introducerea în sistemul de expresie, expresia indusă, purificarea și analiza produsului.

Prezentare generală a expresiei proteice

Clasificare:

Sistemele de expresie proteică pot fi, în general, împărțite în:

1. Sistemul de expresie nucleară: Escherichia coli este cel mai frecvent sistem de expresie proteică, care are avantajele unui fond genetic clar, reproducere convenabilă, costuri reduse și expresie ridicată. Cu toate acestea, îi lipsește mecanismul de modificare a traducerii și nu este potrivit pentru glicozilare sau clivaj special al punctului de selecție pentru a modifica expresia proteinei. Bacillus subtilis poate fi, de asemenea, utilizat pentru exprimarea proteinei, iar avantajele sale sunt o capacitate de expresie metabolică puternică și o activitate scăzută de protează, care a atras treptat atenția.

2. Sistemul de expresie eucariotă: un anumit grad de glicozilare poate fi obținut după traducere, care este mai aproape de activitatea naturală a proteinelor eucariote. Este inclus în principal. ① Sistemul de expresie a drojdiei (drojdie roșie comună, drojdie de preparare etc.), drojdia poate fi moale de înaltă densitate, poate fi modificat după traducere, are avantajele celulelor gazdă procariote și eucariote și este, de asemenea, un sistem bun de expresie proteică. ② Sistem de expresie a celulelor insectelor: genele exogene sunt transfectate în celule de insecte de vectorul baculovirus pentru exprimare. Este un sistem de expresie ridicat pentru proteinele eucariote, care este potrivit pentru proteinele membranei, proteinele macromoleculare, proteina kinaze și alte proteine care sunt dificil de exprimat în sistemul procariot. System Sistemul de expresie a celulelor mamifere: eficiența de traducere și decorare a celulelor mamifere este mult mai mare decât cea a sistemelor de celule de drojdie și insecte. Structura și funcția celulelor mamifere sunt mai aproape de proteinele eucariote autohtone, dar nivelul de expresie este scăzut, iar costul este ridicat.

3. Sistem de expresie fără celule: Proteinele țintă pot fi exprimate direct din particule și produse PCR, iar sistemul de expresie este extracte fără celule din Escherichia coli, embrioni de grâu, reticulocite de iepure, etc. Avantajele expresiei proteice fără celule sunt capacitatea de a exprima produse dificil de exprimat în alte sisteme, de randament ridicat și automatizare, dar de expresie scăzută și costuri mari.